...长出了菌落,但提质粒跑电泳,分子量比目的质粒大很多,为什么

质粒有超螺旋，环状还有复制不完全三种，可能会同时存在于大肠杆菌中，所以你所提出来的质粒直接电泳时无法判断分子量的，如果想看看是否插入成功，你可以将你的片段酶切下来再进行电泳，来证明是否有插入，才比较可行

[企业回答] 

1.有些DNA MAKER的质量不是很好，略微的偏差是正常的。2.电泳时质粒的状态对最后的结果有很大的影响，双螺旋闭环的质粒电泳时跑得快，比实际偏小，而提取质粒时裂解过了的质粒会开环，此时电泳结果与实际大小差不多。所以要电泳得到正确的质粒大小，最好单酶切。3.如果载体酶切的粘末端一致，很有...

可能是质粒在转菌后部分碱基出现错配或者突变导致你酶切的位置发生变化.因为你pcr扩增只是你引物的位置只要不突变就可以正常扩增.建议你做个测序.

电泳虽然可以判断DNA分子量大小，但是前提是要求DNA以线性状态存在。如果质粒没有经过酶切，通常是以超螺旋结果存在的，这种结构比线性DNA迁移速度快，通常在电泳时跑在前面。而PCR产物则肯定是线性的DNA。可以将质粒进行单酶切后，再与PCR产物共同电泳，才能比较质粒和PCR产物的大小。

这个可能性很多啊。最大的可能是你的酶污染了其他酶。还有这种问题你要是觉得其他两条带大小正确，就不要太纠结了，往后做吧。如果非得找原因的话，再重复几次，酶用量，酶切时间之类的多考虑点。

有没有双酶切之后连接插入了其他片段？如果有的话把差值算上，5900是pET32a原始质粒的分子量。

酵母双杂交，营养缺陷培养基长出菌落，但提质粒 发展起来的各种双杂交系统大多是以Fields等人建立的系统为基础的。这些新系统主要对报道基因、“诱饵”表达载体以及“猎物”表达载体等做了一些改进。其中一个重要改进是引入额外的报道基因，如广泛采用的HIS3基因。经过改造带有HIS3报道基因的酵母细胞，只有当...

一般混杂有蛋白质大分子。解决之道：给你的DNA溶液中加入氯仿，混匀，离心或者静置使分层，取上清液（不要贪，不要完全彻底取完）再上样电泳就应该好了。原理：氯仿会使水溶液中的蛋白质杂质变性，变形蛋白由于双亲性，存在于油水分层界面之处，如果蛋白很多，界面会呈现肉眼可见的白色甚至淡黄色。

第四、五组的质粒大部分是超螺旋的，也有少量的线性质粒和更少的开环质粒，第五组的质粒量比第四组多，大概为第四组的3倍左右。该质粒的分子量大体上与Marker的第二条带的分子量相当。