正交位点特异重组酶位点用于哺乳动物细胞中表征蛋白质变体功能

位点特异性DNA重组酶在哺乳动物细胞工程与合成生物学领域扮演着关键角色。传统方案利用重组酶介导的盒交换技术，然而，Cre或Flp等酪氨酸重组酶的可逆性限制了整合反应的效率。相比之下，Bxb1噬菌体丝氨酸DNA重组酶凭借其高酶活性、不可逆性以及人类细胞基因组中缺乏混杂假位点的特点，成为新生物技术（包括STRI...

Cre重组酶由343个氨基酸组成，是一种位点特异性的DNA重组酶，可以特异性识别loxP位点。loxP位点来源于噬菌体P1，由两个13bp的反向重复序列和一个8bp的间隔区组成，其功能是作为Cre重组酶的识别位点。通过Cre重组酶在loxP位点的结合、二聚体形成、与另一个loxP位点的连接，实现DNA序列的删除、反转或交换。

Cre重组酶不仅具有催化活性，而且与限制酶相似，能识别特异的DNA序列，即loxP位点，使两个loxP位点间发生基因重组。Cre重组酶无需借助任何辅助因子，可作用于多种结构的DNA底物，如线形、环状甚至超螺旋DNA。当基因内存在loxP位点且有Cre重组酶存在时，Cre重组酶便会与loxP位点两端的反向重复序列区结合形成...

条件性基因敲除小鼠的设计主要依靠Cre/LoxP或Flipe/Frt系统，这些系统都是位点特异性重组酶系统。以Cre/LoxP系统为例，首先在待敲除的目标DNA序列两端插入两个LoxP序列，形成flox小鼠。接着，将flox小鼠与带有特定细胞表达Cre重组酶的小鼠交配，通过Cre重组酶的作用，实现目标基因在特定细胞中的敲除，即条件...

同源重组，又称基因转移法，是一种精密的生物技术手段，用于将外源基因精准地插入到受体细胞的染色体特定位置。其原理在于，当有与导入基因相似的同源序列存在时，重组酶，如整合酶和解离酶/转化酶家族，会在特定的附着点（att）催化单或双交换，从而替换缺陷基因片段，实现基因修复。位点特异性重组依赖于...

作用：在抗体及Fc融合蛋白的表征应用中表现出色。特点：具体使用细节未详述，但已知其在相关表征中具有重要作用。Papain：作用：酶切铰链区上方的H，将蛋白切割为Fc和两个Fab区域。应用：评估双抗配对的有力手段，且成本低廉。注意事项：特异性较低，使用时需严格控制条件。GinsKHAN：作用：专为铰链区上方...

在基因敲除小鼠制作过程中，需要针对目的基因两端特异性片段设计带有相同片段的重组载体，将重组载体导入到胚胎干细胞后外源的重组载体与胚胎干细胞中相同的片段会发生同源重组同源重组示意图一、Cre/Loxp系统Cre重组酶（37℃）位点特异性重组酶，介导loxp位点间的序列同源重组70%重组率，无需辅助因子，多种...

位点特异性重组 是发生在两条DNA链特异位点上的重组，重组的发生需一段同源序列即特异性位点(又称附着点；attachmentsite，att)和位点特异性的蛋白因子即 重组酶 参与催化。重组酶仅能催化特异性位点间的重组，因而重组具有特异性和高度 保守性 。根据氨基酸序列相似性和催化机制的差异，位点特异性重组酶...

Cre-loxP重组系统包括Cre重组酶和loxP位点两个部分,Cre重组酶由大肠杆菌噬菌体P1的Cre基因编码,loxP位点是Cre酶作用的特异性重组位点,由两个13-bp的反向重复顺序和8-bp间隔区域构成。Cre重组酶可切除同向重复的两个loxP位点之间的DNA片段和一个loxP位点,保留一个loxP位点〔21〕。Cre-loxP重组系统可在哺乳类细胞和...