4.FasFas又称作APO-1/CD95,属TNF受体家族。Fas基因编码产物为分子量45KD的跨膜蛋白,分布于胸腺细胞,激活的T和B淋巴细胞,巨噬细胞,肝、脾、肺、心、脑、肠、睾丸和卵巢细胞等。Fas蛋白与Fas配体结合后,会激活caspase,导致靶细胞走向凋亡。5.p53是一种抑癌基因,其生物学功能是在G期监视DNA的完整性。如
4. 将样本用Proteinase K工作液处理15至30分钟，在21至37°C的条件下，或者加入细胞通透液8分钟。5. 用PBS溶液对样本进行两次漂洗。6. 制备TUNEL反应混合液：将50微升TdT与450微升荧光素标记的dUTP溶液混合均匀。对于阴性对照组，仅加入50微升荧光素标记的dUTP溶液；对于阳性对照组，先加入100微升DNase ...
2、 加氯仿前的匀浆液可在-70℃保存一个月以上,RNA沉淀在70%乙醇中可在4℃保存一周,-20℃保存一年真核生物的基因组是DNA,为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢?因为真核生物的基因含有大量的非编码区,称为内元(intron),真正编码蛋白的区段是被这些内元隔开的,这些编码区叫做外元(exon)。真核生物的...
操作步骤（Promega公司）1. 脱蜡：用二甲苯浸洗5 min×2次；2. 水化：用梯度乙醇（100％×5 min、100％×3 min、95％×3 min、85％×3 min、70％×3 min、50％×3 min）；3. 浸洗：0.85％NaCl×5 min→PBS洗5 min；4. 固定：浸入4％多聚甲醛15 min；5. 浸洗：PBS 5 min...
(2)运用非线性模型(如多元自适应回归线条(MARS)和随机森林),绘制了七个人类细胞系中的十一个组蛋白修饰和DNase I超敏反应图谱[2]。这些模型仅考虑启动子位点的表观遗传模式,而不考虑增强子位点信息。相反,DeepExpression[3]利用HiChIP数据[4](一种捕获蛋白质中心染色体环的高通量技术)来考虑增强子和增强子与启动子...
为了使基因片段能有效转录和翻译,5′端应接上T7启动子序列和SD序列，去掉3′端的终止密码子,从而成功地使核糖体停留在mRNA3′末端,将蛋白质和mRNA连接在一起。在对基因片段改造时,常进行多次延伸PCR：①分别将需要的基因片段和间隔序列各自扩出来② 用引物 4 和引物 5 做连接 PCR 将目的基因和间隔...
而EDTA是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂，用来螯合大肠杆菌细胞中的所有二价金属离子以及抑制DNase'的活性。d) 加入200μL新鲜配制的碱裂解液II于每管细菌悬液中，盖紧管口，轻柔颠倒离心管5次，确保离心管的整个内壁均与碱裂解液II接触，以混合内容物，这个过程切勿振荡！之后将离心管放置在冰...
1. DNase I法:PCR混合液(未加模板和Taq聚合酶)加入0.5U DNase I,室温反应30 min后加热灭活,然后加入模板和Taq聚合酶进行正常PCR扩增。该方法的优点是不需要知道污染DNA的序列;(三)尿嘧啶糖苷酶(UNG)法由于UV照射的去污染作用对500bp以下的片段效果不好,而临床用于检测的PCR扩增片段通常为300bp左右,因此UNG的...
共分离4次,总时间约20 min。1.4.2 B组(长时酶解法) 将卵巢组织块用1 mL注射器针尖均切为3小块,置于500 μL卵泡酶解液(α?MEM?HEPES,3 mg/mL胶原酶I,1 mg/mL DNase I)中,在37 ℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中消化20 min,第20分钟时将其从培养箱取出,用200 μL移液枪吹吸消化液30次。在体视...
1.配备约相当于35mg unsectioned core的FFPE物体。2.添加1毫升浓度100%甲笨后混合均匀，安放在50度的环境里三分钟。3.以最大的转速分离出甲笨，时间设定为二分钟。4.用1 mL 浓度100%乙醇清洗小球。？？5.添加消化缓冲溶液与蛋白酶 6.RNA可放于 50°C/80°C中培养。DNA放于50°C中。7.准备...