使PCR引物的5′端含有可切成粘性末端的限制性内切酶酶切位点的识别序列，在PCR反应结束时, 将PCR产物再用相应的限制性内切酶进行处理，以便于克隆到含相应限制性内切酶酶切位点的质粒载体上. 这两种方法虽然有效,但均较繁琐.本实验的目的在于利用pBluescript SK(+)质粒、Taq DNA聚合酶及dTTP自制T-A克隆载体, 对从RT-PC
探针的标记过程包括将80ng探针DNA(体积<30μl)倒进一个新的0.5ml离心管中,在沸水中煮5～10分钟,取出,插入碎冰中。然后依次在试管中加入下列成分:10μl 5倍标记缓冲液(含随机引物),2μl BSA(10mg/ml),2μl dATP、dGTP、dTTP等量混合物(浓度为各20μmol/dm3);30μl灭菌蒸馏水,50μl(α-32P)dCTP(10...
5’—ACCACGTAACGGA—3’片段中GTAAC正好和5’一GTTAC一3’碱基互补配对。即5’—ACCACGTAACGGA—3’3’—CATTG—5’接下来就是把剩下的未配对的片段补齐，需要3G：3T：2C 。当然题目条件是让碱基都能连接起来，不考虑DNA聚合酶催化方向，否则只能选C。答案...
它的一些酶学性质较Taq DNA聚合酶更为优越,它能耐100℃高温且2h以上仍有活力,并且具有3’→5’外切酶活性的校正能力,错误扩增的机率比Taq酶降低一倍。后来该公司又从深水潜艇(2010m)排气孔分离的能在104℃生长的Pyococcus菌GB-D株植入Deep Vent DNA聚合酶基因而表达的Deep Vent DNA聚合酶,在95℃的半寿期达23h...
口腔良性赘生物和癌前病变,皮肤鳞状细胞癌组织中可发现HPV-11、16、18型DNA,曾报道喉部HPV-6乳头瘤恶变成喉癌,皮肤疣状表皮发育不良(EV)是HPV潜在致癌作用的证据,EV皮损中发现多种HPV型DNA,并在患者皮肤鳞状细胞癌中检出HPV-5、8、14、17及20型,皮肤鳞状细胞癌似乎是由先已存在的病毒性损害恶变而来。 (二)...
核糖核苷酸：腺嘌呤核糖核苷酸（A）、鸟嘌呤核糖核苷酸（G）、胞嘧啶核糖核苷酸（C)、尿嘧啶核糖核苷酸（U）脱氧核糖核苷酸：腺嘌呤脱氧核糖核苷酸（A）、鸟嘌呤脱氧核糖核苷酸（G）、胞嘧啶脱氧核糖核苷酸（C)、胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸（T）共八种 含氮碱基只有五种：腺嘌呤（A）、鸟嘌呤（G）、胞嘧啶...
然后将温度降至引物的Km值以下,3'端与5'端的引物各自与两条单链DNA模板的互补区域结合,此过程称为退火。当将反应体系的温度升至70℃左右时,耐热的Taq DNA聚合酶催化四种脱氧核糖核苷酸按照模板DNA的核苷酸序列的互补方式依次加至引物的3'端,形成新生的DNA链。每一次循环使反应体系中的DNA分子数增加约一倍。理论...
2.4 针对端粒酶的DNA锚着区抑制端粒酶活性 端粒酶以锚着区与作为引物的端粒DNA的5’端结合,继而延伸端粒. 通过破坏端粒酶的DNA锚着区可抑制端粒酶进行端粒合成,使肿瘤细胞端粒缩短而死亡〔19〕. 但目前尚末有关于此类物质的报道.� 2.5 磷酸酯酶2A对端粒酶活性的抑制 Li �et al〔20〕以人乳腺癌细胞PMC42为研...
如?-32 p-datp)外的其它三种dNTP(如dCTP，dGTP，dTTP)溶液，20mmol/L溶液各1?l。(2) 加入100?ci(10?l)标记物溶液，加入无菌双蒸水至终体积为46.5ul,混匀，加入0.5ul稀释的DNaseI溶液，混匀；加入1ul(约5单位)E.coli DNA polymerase I，混匀。(3) 置14-16℃反应1-2小时。4...
(1)取25ng模板DNA (适当增大加入量)溶解在5~20 μL蒸馏水中,沸水浴加热 5 min,然后立即冰上制冷。 (2)冰上加入以下试剂: 1 μL dATP 1 μL dGTP 1 μL dTTP 10 μL 随机引物缓冲液(Random Primer Buffer) 3 μL 50 μCi, [a-32P] dCTP, 3000 Ci/mmol/L-1 1 μL Klenow 酶(5 U/μL)...