dntp mix

将配好的反应 mix 在 PCR 仪中 65℃变性 10min,可有效减少 RNA 的二级结构。加热后迅速置于冰上骤冷,放置 5min。在反应 Template primer mix 中按体系配方顺序,依次加入以下试剂: 2 号管的 5×反转录酶 buffer, 4 号管 dNTP mix, 3 号管 40 U/μl 的 RNase 抑制剂, 1 号管 20 U/μl 的反转录...

PCR mix过期最主要可能出现的问题就是酶失活，或者dNTP失效，其他离子的成分都没太多影响的。你观察到的现象是什么啊？没有条带，还是条带弥散？没有条带基本就是上面两个原因，如果条带弥散，则除了上述两个原因可能模板也会需要重新准备，或者是反应条件需要改变。如果担心PCR Mix自身带来影响，就暂不...

我不知道mix里的buffer以及GC buffer的成分是什么样的，如果大多数成分相同，就可能会导致缓冲液浓度过高，如果两者完全不同的话，或许还能做这个实验。假如反应体系总体积变化的话，热动力学又会完全不同，而且还要调整这两者的用量。我觉得最好是单独使用GC buffer、酶、dNTP和镁离子，然后略提高退火温度...

你是以什么为模版？用什么酶？这些其实都会影响具体的比例的。说个大概的吧。以cDNA为模版，cDNA浓度大概100ng/ul，酶用taq。5Xbuffer——2ul 模版——0.5ul 酶——0.5ul 引物——0.5+0.5 dNTP mix——1ul dd H2O——补足10uL体系即可 双蒸水的pH要求其实不是特别严格，毕竟有buffer调节...

指的是做PCR时的预混液，将除了模板、引物以外其他的组分按照最佳配比混合在一起的混合液，使用时直接加入模板和引物就可以，这样做节省时间，也不用考虑反应体系性能问题。

母液是化学沉淀或结晶过程中沉淀或晶体分离后剩下的饱和溶液，反应液一般是指PCR mix，里面已经包含了PCR buffer，聚合酶，和dNTP。PCR mix胜在使用方便

1. BigDye测序反应试剂盒 主要试剂是BigDye Mix,内含PE专利四色荧光标记的ddNTP和普通dNTP,AmpliTaq DNA polymerase FS,反应缓冲液等。2. pGEM-3Zf (+) 双链DNA对照模板 0.2 g/L,试剂盒配套试剂。3. M13(-21)引物 TGTAAAACGACGGCCAGT,3.2 μmol/L,即3.2 pmol/μl,试剂盒配套试剂。4. DNA测序模板 ...

1．bigdye测序反应试剂盒 主要试剂是bigdye mix，内含pe专利四色荧光标记的ddntp和普通dntp，amplitaq dna polymerase fs，反应缓冲液等。2．pgem-3zf (+) 双链dna对照模板 0.2g/l，试剂盒配套试剂。3．m13(-21)引物 tgtaaaacgacggccagt，3.2μmol/l，即3.2pmol/μl，试剂盒配套试剂。4．...

可能浓度不同。要慎重一下使用呀！ 尽量别交叉使用。对你的实验结果必然有影响

第二阶段的DNA修饰酶克隆方法依赖于T4 DNA聚合酶，它具有3'→5'核酸外切酶活性和5'→3' DNA聚合酶活性。在缺乏dNTP时，酶表现3'→5'核酸外切酶活性，切割目的基因和载体，生成单链DNA粘性末端；加入单一dNTP后，平衡表现为3'→5'核酸外切酶活性和5'→3' DNA聚合酶活性，切割与掺入达到动态平衡，...