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8.乙酸(浓的): 可能因为吸入或皮肤吸收而受到伤害,要戴手套和护目镜,最好在化学通风橱中操作。9.过硫酸酸铵:对粘膜和上呼吸道、眼睛和皮肤又较大危害性,吸入可致命。操作时戴手套、护目镜。始终在通风橱中操作。10.氯化铯:可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。操作时戴手套和护目镜。DT...
还原反应:二硫键最重要的一个特性就是它在还原剂作用下的裂解。使二硫键裂解的还原剂较多。在生物化学中,常用的还原剂有硫醇如β-巯基乙醇(β-mercaptoethanol,β-ME)或二硫苏糖醇(DTT)。通常要使用过量硫醇试剂保证二硫键的完全裂解。其它还原剂还有三(2-羧乙基)膦[tris(2-carboxyethyl)...
常用浓度的去垢剂SDS,Triton X-100,Tween不影响检测结果,但受螯合剂(EDTA,EGTA)、还原剂(DTT,巯基乙醇)和脂类的影响。实验中,若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高,可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。简介 二价铜离子在碱性的条件下,可以被蛋白质还原成一价铜离子,一价铜离子和独特的BCA...
根据蛋白质胶体稳定性原理,可以通过破坏这两个主要稳定因素,使蛋白质分子间的引力增加聚集沉淀。如盐析法、有机溶剂沉淀法。如果加人适当的试剂使蛋白质分子处于等电点状态或失去水化层,蛋白质的胶体溶液就不再稳定并将产生沉淀。蛋白质溶液可因下列试剂的加入而发生蛋白质沉淀。
通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子量之间的关系,即可确定多肽链的数目。3 二硫键的断裂。几条多肽链通过二硫键交联在一起,可在8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下,用过量的-巯基乙醇处理,使二硫键还原为巯基,然后用烷基化试剂保护生成的巯基,以防止它重新被氧化。二硫键的切割...
选择一种蛋白测定方法时,需要考虑两个重要因素:缓冲液的化学组成和检测的蛋白量。基于dford方法的Quick Start Bradford和Bio–Rad 蛋白测定灵敏度高,可以兼容糖、巯基乙醇、DTT等。而对于去污剂和NaOH这两种干扰Bradford测定的物质,DC蛋白测定却可以兼容。如果蛋白是在loading buffer中,准备跑1D或2D电泳...
如果沉淀物不影响实验结果,可以暂时继续使用,但一旦确认沉淀物的存在,应当将其去除并重新配制缓冲液。这有助于保证实验的准确性和可靠性。在实验过程中,保持良好的实验室卫生习惯和严格的实验操作规程是防止细菌污染的关键。此外,定期检查实验用水的质量,确保所有试剂和溶液都是纯净的,也是避免类似问题...
7、Tris- HCl平衡苯酚 8、苯酚/氯仿/异戊醇 9、10%(W/V)SDS 10、2N NaOH 11、2.5 N HCl 12、5 M NaCl 13、20%(W/V)Glucose 14、Solution I 15、Solution II 16、Solution III17、0.5M EDTA 18、1 M DTT 19、10mM ATP ...
10mmol/L DTT(二硫苏糖醇) 10×bnffer L—低盐:缓冲液O 0.5mol/L Nacl 10×bnffer H—高盐:缓冲液O 1.0mol/L Nacl2、操作步骤:(1)将DNA(0.2~1.0μg)溶液加入EP管中,并加入适量H2O总体积为18μL,混匀。(2)加入2mL 10×限制酶缓冲液,根据厂家建议的盐浓度选择不同的缓冲液。(3)加1~2U限制...
药品:提取液:含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。裂解液:2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中(终体积为5ml),使用前再加入1M的DTT65ul/ml。这种方法针对双向电泳,杂质少,离子浓度小的特点!当然单向电泳也同样适用,只是电泳的条带会减少!三、组织:肠黏膜 目的:WESTERN BLOT检测...