将第1级质谱得到的肽片段质量指纹图谱、肽质量指纹图谱与第2级质谱得到的肽序列信息一起用来检索蛋白质数据库，找出匹配的蛋白质。1.7 数据库检索 将质谱鉴定所得的肽质量指纹谱（peptide mass fingerprinting， PMF）数据于Bio-Works（Thermo Finnigan， San Jose， CA）软件搜索相应的库。搜索使用的数...
第一步: 去石蜡,先用二甲苯室温浸泡5分钟,两次,再换甲醇室温浸泡5分钟,两次。看起来很简单,但整个过程中会经过混旋。 第二步: 蛋白裂解,因为蛋白被福尔马林或甲醇固定得非常紧了,有的人会选择加入水,让样品泡涨,我们更推荐加入裂解液(0.1M Tris-HCI, pH 8.0, 0.1M DTT),充分水化被固定的蛋白样品,然后匀...
其最大的特点是,敏感度好,是Lowry 和BCA 两种测试方法的2 倍;操作更简单,速度更快;只需要一种反应试剂;化合物可以稳定1小时,方便结果;而且与一系列干扰Lowry,BCA 反应的还原剂(如DTT,巯基乙醇)相容。但是对于去污剂依然是敏感的。最主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大,无可比性。 某些初次...
⑶加入5×反应液4uL,RNase抑制剂1uL,dNTP 2uL(这些应该先配好,然后分再装到每一管),混匀;⑷37度水浴5分钟,加入1uL AMV-RT反转录酶,混匀;⑸37度水浴1小时(此步是反转录过程);⑹70度10分钟结束反应(此处是灭活酶活性,避免对后续实验产生干扰),产物置冰上进行下一步PCR实验,余下的-70度保存。2.3 RT-...
10×LigationBuffer成分：Tris-HClpH7.8600mMMgCl215mMDTT100mMATP10mM连接条件推荐在10~20ml反应体系中进行接反应，反应中DNA浓度最大可达1mM（1kbDNA约1mg/ml）。首先混合要接的DNA片段，加入10×LigationBuffer至终浓度为1×，再加入适量T4DNALigase混匀。最适连接温度为16℃。粘末端连接效率较高，加入...
..产品：Coolaber SD/-His with Agar产品编号：PM2122目录价：￥1198.00，优惠价：￥998.00 5. Environmental Science-Nano (IF: 8.131)文章：Thermo-responsive polymer-black phosphorus...产品：Coolaber 吖啶橙（AO）- EB双染色试剂盒产品编号：SL7650目录价：￥128.00，优惠价：￥98.00 ...
1.4 双向电泳 1.4.1 血清总蛋白质的提取及定量 血清-70 ℃反复冻融4次后，用Agilent Multiple Affinity Re-moval Column处理去除高丰度蛋白。使用Agilent 5K超滤管进行浓缩除盐，冻干回收的样品，-70 ℃保存。用裂解液（9 mol/L 尿素、4% CHAPS、 65 mmol/L DTT和cocktail酶抑制剂）进行复溶，...
如果1/10的逆转录反应产物加入到PCR中,那甘油在扩增反应中的浓度为0.4%,这不足以抑制PCR。在逆转录反应中经常加入RNase抑制剂以增加cDNA合成的长度和产量。RNase抑制剂要在第一链合成反应中,在缓冲液和还原剂(如DTT)存在的条件下加入,因为cDNA合成前的过程会使抑制剂变性,从而释放结合的可以降解RNA的RNase。蛋白...