gibson assembly kit

将骨架双酶切切开，然后将与骨架带有同源臂的片段用Gibson酶连接，然后再转化，菌落PCR验证出来的条带正确就说明成功了，送去测序验证一下就可以了。

无缝克隆反向设计引物方法如下：线性化目的载体：用酶切或是PCR方式；PCR获取目的片段。无缝克隆的原理首先要强调的是，无缝克隆有两个主要的流派：Gibsonassembly和GoldenGateassembly。退火温度需要比解链温度低5℃，如果引物碱基数较少，可以适当提高退火温度，这样可以使PCR的特异性增加；如果碱基数较多，...

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无缝克隆的原理首先要强调的是，无缝克隆有两个主要的流派：Gibsonassembly和GoldenGateassembly。退火温度需要比解链温度低5℃，如果引物碱基数较少，可以适当提高退火温度，这样可以使PCR的特异性增加；如果碱基数较多，那么可以适当减低退火温度，是DNA双链结合。原理：PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的...