q pcr技术

relative qualification 是相对定量，不需要做标准曲线，比较不同目的基因之间的相对差异 absolute qualification是觉得对定量，要有标准品做标准曲线，根据标准曲线的截距和斜率来计算目的基因的绝对含量

注意操作的一致性以及稳定性，一般情况下不同批次是有批间差的，但是实验流程相对比较成熟的实验室，或者老师批间差不会很大，我们实验室要求相同样本批间差在0.2Cycle以内。建议你多做几组重复。

探针是荧光标记的，5'端有荧光标签（F），3'端有荧光淬灭标签（Q）。聚合酶在延伸引物时，遇到探针后开始降解，释放出荧光。整个过程通过荧光仪检测，荧光强度随每轮扩增增加，代表复制DNA链的数量。本期内容介绍了PCR、RT-PCR和qPCR的技术原理，下期将详细讲解PCR技术的实验步骤和注意事项，感兴趣的...

荧光素二醋酸（FDA）等。ROS的荧光强度与铁死亡呈正相关，但在检测过程中需要全程避光。通过q-PCR或WB检测，可以间接检测铁死亡。在发生铁死亡的细胞或组织中，GPX4、FIH1的表达下调，而COX2、ACSL4、PTGS2、NOX1等的表达上调。通过检测这些基因的mRNA表达水平或蛋白表达水平，可以评估铁死亡的情况。

不一定。如果在设计引物时，做Q-PCR的引物已跨内含子，即使有残留DNA，也不会影响Q-PCR，只要观察PCR反应结束后的解离曲线，如果解离曲线过关，说明产物特异性没问题，则数据可以用。

housekeeping gene的引物设计与你想探测的目标基因引物设计方法相同，而且一般文献上都应该给出，遵照文献使用即可，一般问题都会出在目标基因的引物设计上。不过在q-PCR中，housekeeping gene 引物还需注意以下几点 1. 首先找到合适的housekeeping gene，其表达应具有一致可参考性。2. 引物长度在17-22bp。3...

ΔRn 的值表示PCR过程中,探针降解的量,就是PCR产物的量

大部分的定量PCR反应产物的片段长度在80~300bp左右，而80bp的TM值为80℃左右，所以绝大多数的定量产物都是大于80℃的。Tm值跟盐离子浓度、片段长度以及GC含量等因素有关系，所以不要太过拘泥于Tm值，建议你可以通过电泳-测序的方法来确认产物。

QRT-PCR在RT-PCR体系中同时加入内参标基因的引物，使目的基因和内参基因在同一条件下同时扩增。在扩增反映结束之后，可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行半定量分析，但分析的是PCR终产物，不能准确分析未经PCR信号放大之前的起始模板量。real-time PCR：实时PCR(real-time PCR)属于定量PCR（Q-PCR）的一...

这这块不平很正常啊，这个已经是经过计算画出了的，你可以看看溶解曲线原始的数据图，这是溶解曲线的原始数据，如果你的产物Tm比较适中的话，对数画出来的峰你圈出来的位置就相对比较平，如果Tm较低，就是你出现的那种斜的，这跟你的目标产物的Tm有关，你给的两个图里两种样品的Tm明显不同，第一个...