trizol

2. 直接法：加入1ml Trizol试剂，冰上孵育10分钟，4℃离心10分钟后转移上清液。加入氯仿，剧烈振荡后室温孵育5分钟，4℃离心15分钟，小心转移上层水相。加入异丙醇，轻柔颠倒混匀10次，室温放置10分钟，4℃离心10分钟，用75％乙醇洗涤RNA沉淀两次，风干后溶于15μl-50μl DEPC水中。3. 离心柱法：...

这种化合物在生物领域有着重要的应用，主要用于细胞的变性裂解，能够高效地提取RNA和DNA。值得一提的是，GITC具有独特的性质，即它本身不具有RNA酶和DNA酶的活性，这对于生物实验中的核酸提取非常重要，可以防止样本在处理过程中被酶分解。另外，GITC是TRIzol这种新型总RNA抽提试剂的主要成分之一，它能快速...

如果你的实验设计中有阴性和阳性对照或者是要做组间对比，就做半定量，因为即使你做了全定量，最后需要对比的时候也回到了相对关系的倍比值，只不过绕了一大圈。半定量比较简单 不需要做标准曲线，做标准曲线又要浪费24个孔，如果你是用96孔的话 看你的描述，应该是4个分组，做3个目的基因允许有6个...

组织样品用液氮充分研磨，加入 1ml Trizol (Invitrogen)溶液，混匀，室温放置5min 使其充分裂解:(管盖与管壁都需标记样品名称)。2)加入 200!1氯仿，剧烈振荡混匀 30s，使水相和有机相充分接触，室温静置3-5min;(离心时离心管按顺序排放，离心完毕，离心管的顺序也按顺序排好，与第一步的顺序一致...

2.动物组织1) 活体取材后用无菌水或 0.9% 生理盐水漂洗洗净杂质和血渍，将组织分割成50-100mg小块（约黄豆大小），注意低温操作，防止降解；2) 新鲜动物组织用量≥50mg，核酸量低的部位酌情增加送样量；3) 若用Trizol裂解液保存，务必先进行液氮研磨充分再溶于Trizol中，参考20-30mg/ml Trizol，...

1. 离心机的标准旋转速度通常用rpm（每分钟转数）来标识。2. 在Trizol试剂的说明书中，通常会明确指出rcf（相对离心力），它使用地球重力加速度的倍数来表示，通常以×g为单位。3. rpm和rcf之间的转换公式为：rcf = 0.0011 × r × rpm^2，这里r是离心机的转子半径（单位：米）。4. 相应的，...

低离子浓度和低PH条件下，A280值会较高b:样品匀浆时加地试剂量太少c:匀浆后样品未在室温放置2分钟d:水相中混有有机相e:最后得到地RNA沉淀未完全溶解3.RNA降解原因a:组织取出后没有马上处理或冷冻b:样品或提取地RNA沉淀保存于-5--20度，未在-60--70度保存c:细胞在胰酶处理时被破坏d:溶液或...

二、细胞及血液样品采集贴壁细胞1. 贴壁细胞培养或处理结束后，去除培养液；2. 按每10 cm2 培养面积加1 mL TRIzol 试剂的比例加入TRIzol 试剂；3. 用1 mL枪头反复吹打, 使TRIzol接触所有长有细胞的培养瓶表面进行充分消化；4. 转移到RNase-free 的试管中用一次性注射器进行反复抽打细胞直至看不见...

加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量...

1.3 Real-time PCR 反应：1.3.1 方法学确认 根据引物相关信息PCR扩增，PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分析并且对其纯化，假设纯化所得DNA浓度为a×10x，对其做10倍梯度稀释7次，稀释浓度依次为a×10x-1、a×10x-2、a×10x-3、a×10x-4、a×10x-5、a×10x-6、a×10x-7选择合适稀释品作为标准品...