质粒和目的基因片段分别双酶切(bamh1,xba1)连接后电转感受态细胞,同时...

现在我们就需要把SUN片段连到一个载体，用VectorNTI打开，研究一下用哪个酶处理，这个载体需要用Sma1这个酶切开，然后用SUN连上，替换切下来的ccdb，这里要用到两个酶，一个Sma1限制性内切酶切开，一个DNA连接酶把新片段连上，植物转基因载体和这些酶都是非常常用的试剂。载体构建好之后需要把它们导入...

单酶切来做连接无法选择目的片断插入的方向，插入产物有正反向两种。单酶切载体也很容易产生自连（所以单酶切为了防止自连常用ciap处理）不同酶的双酶切做连接可以保证插入方向性，也能防止自连，理论产物只有一种

还有一种情况,当只扩增一种目的基因时,也可以使用Specific Primer(PCR时的下游引物)作为反转录引物。 操作步骤 步骤简述如下:按照下图中1配制溶液,然后65℃处理后加入3中所配制溶液继续后续反应即可。 连接产物的转化 常用的感受态细胞有DH5α、BL21(DE3)、Rossetta等,而抽提质粒一般用DH5α,可以自己制备也可以...

正确重组的质粒个数也会大大减少；2、设置一个自连对照，相同摩尔数相同条件，一个重组连接一个自连连接，然后一起转化，观察重组板与自连板克隆数之比，接近的话，就需要在重组板多挑几个克隆，提质粒后酶切鉴定，重组板比自连板多几个数量级的话，挑1-2个克隆摇菌提质粒双酶切鉴定即可。

质粒自连说明双酶切没有切开。不知道你的buffer是怎么选的，如果两种酶在buffer中的活性不同的话，活性较低的那个可以加大酶量，同时延长酶切时间，或者更换buffer。条件需要自己摸索。

恩 就是质粒 感受态的大肠杆菌 把T载体转进去 然后摇菌培养 这样载体就会随着菌的扩增而扩增 然后就可以提质粒拿去测序或者别的后续实验 因为连接完的载体浓度是很小的

我用BamHⅠ和XholⅠ分别双酶切28a质粒和目的片段,然后胶回收,用T4连接酶连接,4°过夜,转化后不长菌是什么原因?望大神指点!!... 我用BamHⅠ和XholⅠ分别双酶切28a质粒和目的片段,然后胶回收,用T4连接酶连接,4°过夜,转化后不长菌是什么原因?望大神指点!! 展开  我来答 分享 新浪微博 QQ空间1...

说得不够详细。你提取好质粒之后是怎么验证的？单酶切验证还是双酶切验证？还是不酶切就直接电泳？1.确保酶切时间足够，以保证提取好的质粒完全切开。2.检查目的基因上或者载体上是否还有别的相同的酶切位点。第一点的可能性较大。另外，最好带上空载体做对照，从酶切到电泳，全程对照。

1、提取目的基因 获取目的基因主要有两条途径：一条是从供体细胞的DNA中直接分离基因；另一条是人工合成基因。直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”，又叫“散弹射击法”。2、目的基因与运载体结合 目的基因与运载体结合的过程实际上是不同来源的DNA重新组合的过程，是基因工程的核心。3、将目的基因...

基因克隆(gene cloning)或分子克隆,又称为重组DNA技术,是应用酶学方法,在体外将不同来源的DNA分子通过酶切、连接等操作重新组装成杂合分子,并使之在适当的宿主细胞中进行扩增,形成大量的子代DNA分子的过程。例如,要获得人类基因组中的某个基因,我们就需要借助基因克隆技术,进行目的基因的分离、克隆和扩增。因此,接下...