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质粒和目的基因片段分别双酶切(bamh1,xba1)连接后电转感受态细胞,同时...
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（1）限制酶和DNA连接酶；（2）重组质粒和未重组质粒；（3）含有重组质粒的细菌和导入不成功的细菌；（4）将存活的细菌转入含氨卡青霉素的培养基中培养；（5）；（6）XbaⅠ和BclⅠXbaⅠ和BclⅠ ...
胰岛素基因）使产生相同的粘性末端，将切取的胰岛素基因片段插到质粒的切口处，再用DNA连接酶使质粒和胰岛素基因结合成重组质粒 3，将重组质粒导入受体细胞（如大肠杆菌，用感受态细胞法即Ca+处理）4，检测与鉴定 ...
构建载体时，转化过后不长菌的原因：转化的时候有误，可以重新实验。目的基因和载体都切开，特别是目的基因如果是PCR后直接酶切效率会较低；载体上两个酶切位点连在一起，感受态的效率问题，转化过程对不对，如抗生素加的对...
将反转录的总cDNA作为模板，通过PCR 特异的P53引物，克隆出这个基因 然后凝胶电泳分离纯化PCR产物；然后将该PCR产物插入到带有抗性的大肠杆菌质粒中。涂板后，筛选阳性克隆数个，再用酶切作鉴定，找到合适的质粒；最后再将该...
为了增大导入的成功率，常用Ca2+处理，得到感受态细胞，此时细胞壁和细胞膜的通透性增大，容易吸收重组质粒．未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱．故答案为：（1）黏性末端 平末端（2）切割产生的DNA片段末端与...
作为标记基因．（4）绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程中涉及到基因工程、核移植和胚胎移植，图中⑤⑥⑦过程属于核移植技术．故答案为：（1）HindIII和PstI Ti质粒（2）2 磷酸二酯键（3）目的基因 标记基因（4...
原因是相同的粘性末端形成消化，就像一个拼图，除了内容，双方充分满足。结合方式太多的可能性，如质粒和靶基因已正确连接，反转连接质粒和靶基因，质粒和质粒连接，连接目的基因和靶基因。 双酶切一般会有三个频段，正确的现象...
最后将载体和目的基因链接，构建重组质粒。2.设计引物，自带酶切位点，扩增目的基因，直接改变目的基因的酶切位点，然后再用和载体相同的限制酶酶切目的基因，切出相同的粘性末端。直接将酶切完成的目的基因和载体连接。
1、载体酶切：将表达质粒用限制性内切酶（同引物的酶切位点）进行双酶切，酶切产物行琼脂糖电泳后，用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。2、PCR产物双酶切后回收，在T4DNA连接酶作用下连接入载体。真核细胞表达载体之一...
比如E1---B1-E1, E1--B1---E1, E1-B1---E1-B1, B1--E1---B1-E1.理想情况下，双酶切只产生一种基因。但是如果酶切位点重叠或紧邻，则会如你所担忧酶切不彻底，产生复杂多种产物。个人认为出题者的意思是目...